科普什么是 ELISA

什么是 ELISA？

酶联免疫吸附实验 (ELISA) 是一种用来定量检测样本中某种抗原的方法。抗原是一种会导致动物免疫系统发起防御反应的毒素或其他外来物质，例如流感病毒或环境污染物。潜在抗原的范围很广，因此在许多研究和检测领域中使用 ELISA 来检测和定量各种样本类型中的抗原，如使用 ELISA 分析细胞裂解物、血样、食品等特定物质。

ELISA 有四种主要类型：直接法、间接法、竞争法和双抗夹心法。每种类型的描述如下，并用图说明了分析物和抗体是如何结合和使用的。

双抗夹心法 ELISA

对于双抗夹心法 ELISA，使用对靶标抗原上的两个不同表位具有特异性的两种抗体。捕获抗体结合到微孔板孔底，并结合该抗原的一个表位。检测抗体结合该抗原的不同表位，并偶联可进行检测的酶。（如果检测抗体未偶联，则需要酶偶联的检测二抗）。

直接法 ELISA

在直接 ELISA 法中，抗原包被在微孔板孔底，然后再结合对该抗原有特异性的抗体，抗体上偶联了可进行检测的酶或其他分子。

竞争法 ELISA

在竞争法 ELISA 中，参照抗原包被在微孔板孔底。将样品和抗体加入孔中，如果样品中存在抗原，则它会与参照抗原竞争结合抗体。洗掉没有结合的物质。样品中的抗原越多，最终孔底结合的参照抗原的抗体就越少，信号就越弱。

间接法 ELISA

在间接 ELISA 法中，抗原包被在微孔板孔底，然后加入对该抗原有特异性的抗体。随后加入酶或其他检测分子的二抗结合一抗。

双抗夹心法 ELISA 检测的步骤

大多数夹心 ELISA 都在微孔板中进行，其中微孔板孔的底部用作抗体与其他试剂结合的固体表面。微孔板洗板机用于洗去孔中的非特异性物质，而吸光度 ELISA 微孔板读板机则检测存在靶抗原时产生的颜色变化。而且，读板机软件也可用于绘制标准曲线并计算结果。

第 1 步： 捕获抗体与 ELISA 板孔结合

第 2 步： 将样品添加到孔中 – 样品中的抗原与捕获抗体结合。

第 3 步： 洗涤微孔板 – 洗去未结合的物质，仅留下感兴趣抗原

第 4 步： 添加检测抗体 – 酶偶联检测抗体与感兴趣抗原上的第二个位点结合

第 5 步： 洗涤微孔板 – 洗去未结合的抗体，仅留下对感兴趣靶标具有特异性的抗体

第 6 步： 添加底物 – 底物通过检测抗体上的酶发生转化，从而产生颜色变化

第 7 步： 读取板 – 微孔板读板机检测有色反应产物并输出光密度 (OD) 值

第 8 步： 计算结果 – 计算并分析每份样品中的抗原量

虽然 ELISA 设置容易，但检测程序耗时耗力。适用于高通量微孔板测定的实验室自动化工作流程可实现无人值守，提升测定程序的通量、有效性、效率和可重复性。